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2015年11

华东理工大学培训总结


生命科学学院   陈惜燕

 

 

西北农林科技大学生物工程实训中心是学校投资一千万建立的并委托生命科学学院代为管理的作为我校生物工程类及其相关学科和专业学生的综合性、系统性实验实训基地和生物制药中试平台。该中心是以生物技术产业中典型工业微生物发酵生产抗生素类原料药及其制剂加工为主线,目前该中心的GMP固体制剂实训平台已经投入使用,但是由于菌种的关系,发酵及提炼实训平台一直迟迟无法启用,导致该生物工程实训中心无法全面的投入使用。前前后后2年时间,经过生命学院领导努力的与国内抗生素原料生产资质单位的多次洽谈,最后,华东理工大学愿意给土霉素的菌种并且提供土霉素的整套发酵及提炼系统的培训。因此,生命学院派出了4名专业老师到华东理工大学进行土霉素的发酵及提炼为期3-4个月的系统培训。而我是借此机遇并且是在西农大型仪器管理人员外出培训的机会下同生命学院其他4位老师一同去了华东理工大学,学习土霉素的高校液相色谱检测方法,为期一周时间。

华东理工大学生物工程学院的生物反应器工程国家重点实验室,主要从事生物反应器工程的基础与应用基础研究,其前身是我国最早的抗生素制造工学专业(华东化工学院,1955)和生化工程专业(1980),是国内第一个获得生物化工博士点授予权(1992)的单位。生物反应器工程国家重点实验室发酵过程优化与放大服务平台,是以生物发展过程技术为基本内容的生物技术转化支撑体系和服务链,得以解决生物技术与生物医药产业共性、关键技术问题,带动生物技术与医药、能源、环保、农业、化工、食品等行业技术进步。土霉素的发酵工艺为该平台的技术强项和成熟的工艺技术。

 

一:培训内容:

土霉素生产总工艺简约流程图

砂土孢子              斜面孢子      一级种子培养       二级种子培养

发酵液                酸化液               稀释液              滤液                脱色液

结晶液                 湿结晶              土霉素碱成品

实验从一级种子培养开始到二级种子培养,再取发酵液进行酸化处理,才能够进行高效液相色谱分析检测。

(一)样品预处理

酸化处理:产土霉素菌在发酵培养过程中,产生的发酵产物土霉素形成盐类附在菌丝体上,所以需要对发酵液进行酸化,释放出土霉素。

1)取发酵液2mL,添加50μL左右的9moL/mL盐酸进行酸化,调节pH1.5-1.7,振荡均匀,放置5min后,12000rpm离心5min,取上清液,将上清液转移至另外一个EP管中,-20℃保存。

2)稀释,由于测定时样品中的OTC浓度应不超过100U,所以一般稀释100倍后,过0.22μm水系滤膜,上机检测。

(二)高效液相色谱法检测

液相色谱条件:

色谱柱:Kromasil 100-5-C18 (4.6×200mm)

流动相:超纯水:甲醇:乙腈:0.2mmoL/mL的磷酸缓冲液=(60:10:20:10)

流量:0.8mL/min

波长:350nm

柱温:35

二:学习体会

(1)胸怀宽广,与兄弟院校技术共享。这次上海华东理工大学之行,让我充分的体会到高校与高校之间技术的交流与共享,充分的体现到一所名校的胸怀,我们学院在与华东理工大学合作之前是接连谈了几家单位,特别是公司单位,已经谈好确定了合作关系,但后面还是爽约,学院是在没有抱希望的条件下参观了华东理工大学,提到合作关系,对方非常爽快的答应,并派几位专家过来考察西农生物工程实训中心的实际情况,最后论证出做土霉素的中试培养(西农生物工程实训中心原计划是做四环素),对华东理工大学办事的认真,一切尊崇实际情况,技术共享这种胸怀非常值得敬仰;

(2)实验室是真正的开放实验室,华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室共有3层实验室,每层楼每间实验室功能区域明确,一层为菌种培养及上游基因功能研究,一层为小发酵罐兼并分析检测,一层为中试大发酵罐兼并过程质朴分析,这三层实验室既有很多本校的研究生也有合作单位接受培训的人(包括我共5位西农老师还有好几位是其他公司的人)在人源比较复杂,实验室空间非常拥挤的情况下,大家都能非常好的相处,非常好的安排好自己的实验,一方面是大家的自觉,大家用好实验台后各自非常自觉的收拾好自己的东西,绝不占领公用实验空间,另外,要做好对仪器或实验室的预约,在仪器上贴个便利贴,告知使用仪器的日期,需要占用时间,姓名,联系电话。

(3)讲座技术交流非常的多,每天都有讲座,把讲座内容直接在实验室门口滚动式的播放,方便快捷的把信息传递给学生;

(4)这次给我留很深的印象还有一件小事,就是华东理工大学的生物工程学院是栋16层高的高楼,上下只靠2部电梯,一部单层楼,一部双层楼,人流量非常的密集,可是不管人多少,都是非常自觉的排着队,没有扎堆的堵在电梯口的现象。

非常感谢学校给我们实验人员外出培训的机会,很能够开拓我们实验人员的视野,倍感温暖。